ДЕАЕ хроматографија слабе ањонске измене

ДЕАЕ мембранска хроматографија са слабом ањонском изменом – Увод у производ

 

1. Преглед

ДЕАЕ хроматографија слабе ањонске измене је техника пречишћавања заснована на разликама у својствима наелектрисања и густини наелектрисања различитих биомолекула. Пошто већина биомакромолекула садржи функционалне групе као што су карбоксилне или хидроксилне групе, њихове карактеристике наелектрисања и величина могу се подесити модификовањем пХ раствора пуфера. Након што се биомолекули вежу за супротно наелектрисан медијум за измене ањона или катјона, раздвајање се постиже променом јонске снаге или пХ мобилне фазе. Молекули са слабијим афинитетом везивања се прво елуирају, а затим следе они са јачим афинитетом везивања, чиме се постиже ефикасно одвајање

 

2. Предности производа

2.1 Висока ефикасност: Постиже снажно везивање при брзинама протока до 40 пута већим од хроматографије на бази смоле{2}}. У поређењу са традиционалном хроматографијом у упакованом слоју{4}}, мембранска хроматографија скраћује укупно време процеса за приближно 30–40 пута.

2.2 Висока ефикасност везивања: Мембранска хроматографија показује висок капацитет везивања и високу брзину протока под ниским падом притиска, омогућавајући наелектрисаним биомолекулима да буду ухваћени у једном пролазу кроз колону.

2.3 Скалабилност и флексибилност: Пуна серија производа за мембранску хроматографију може задовољити различите потребе за пречишћавањем биомакромолекула, покривајући све фазе од развоја процеса до-производње великих размера. Структурални дизајн типа капсуле{3}} подржава и једнократну-употребу и поновну употребу након чишћења.

2.4 Побољшана продуктивност: Компактан дизајн минимизира отисак објекта. Елиминацијом поступака паковања колоне, чишћења, валидације чишћења и складиштења колоне, систем може да ради директно након еквилибрације пуфера без паковања или складиштења колоне. Трошкови рада могу се смањити и до 50%.

 

3. Технички параметри

3.1 Конструкцијски материјали

	лабораторијска вага	мале размере	пилот размера	обим производње
Запремина мембране	0,2мл	5мл	140мл	5L
Структура носача мембране	полипропилен (ПП)
Мембранско кућиште	полипропилен (ПП)
О прстен	Силицоне

3.2 Радне карактеристике

	лабораторијска вага	мале размере	пилот размера	Обим производње
Запремина мембране	0,2мл	5мл	400мл	5L
Препоручени проток	1-6мл/мин	25-150мл/мин	2-12Л/мин	25-150Л/мин
Максимална радна температура	35 степени
Максимални радни притисак	3 бара (25 степени)
Максимални диференцијални притисак	3 бара (25 степени)
Услови складиштења	20% 乙醇水溶液 20% водени раствор етанола

Слика 1. Промене у капацитету пуњења мембранске хроматографије након вишеструких употреба праћених са БСА.

Поред тога, проценили смо ефикасност уклањања протеина и нуклеинских киселина ћелије домаћина коришћењем ДЕАЕ мембранске хроматографије. Резултати су следећи.

	ДНК				ХЦП
	ИгГ опоравак	Садржај (пг/мг ИгГ) помоћу РТ ПЦР		Фактор уклањања	Садржај (нг/мг ИгГ) од Елисе		Фактор уклањања
Трчи	%	Пре ДЕАЕ мембране	После ДЕАЕ мембране	Дневник	Пре ДЕАЕ мембране	После ДЕАЕ мембране	Дневник
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Табела 1. Стопе уклањања ДНК и протеина ћелије домаћина из ЦХО-експресованог ИгГ помоћу ДЕАЕ мембранске хроматографије.

Серија експеримената је показала да К мембранска хроматографија може ефикасно уклонити нечистоће, уз одржавање високе стопе опоравка циљног ИгГ.

Поред тога, упоредили смо Гудилинг мембранску хроматографију са увозним брендовима, а подаци о капацитету пуњења су следећи.

Слика 2. Перформансе учитавања различитих протеина на нашој мембранској хроматографији и конкурентским производима

Укупна процена показује да је наш капацитет утовара упоредив са увезеним производима.

Слика 3. Перформансе ДЕАЕ мембранског хроматографског модула у тестирању протеина колагена

Користећи ДЕАЕ мембрански хроматографски модул, резултати валидације су показали да се већина циљних протеина колагена може ухватити и елуирати употребом 135 мМ НаЦл.

Кроз тестирање под различитим условима елуирања, открили смо да мембранска хроматографија и хроматографија на агарозном гелу показују слично понашање елуирања, где чистоћа протеина значајно варира под различитим концентрацијама соли. У практичном истраживању и развоју и производњи, неопходно је квантитативно одредити оптималне равнотежне услове елуирања да би се добили циљни протеини високе{1}}чистоће.

 

4. Класични случајеви примене

Уклањање ДНК, вируса, протеина ћелије домаћина и ендотоксина

Хватање плазмида, вируса, нуклеинских киселина и протеина, као и пречишћавање олигонуклеотида

 

5. Оперативни ток посла

5.1: Припрема и монтажа опреме

5.1.1 Модул за мембранску хроматографију треба да буде инсталиран на АКТА хроматографском систему на начин сличан колонама са упакованом смолом, обезбеђујући да је смер протока у складу са стрелицама и смером улаза. Повежите помоћу Луер конектора или спојних спојница.

5.1.2 Подесите улазни проток на 5–10 МВ/мин и користите пуфер за еквилибрацију за испуштање ваздуха. Наставите са испирањем док се на излазу не примете мехурићи, а затим повежите излаз пермеата са хроматографским системом

5.2:Третман пре{0}употребе

5.2.1: Подесите улазни проток на 5–10 МВ/мин и извршите пре-третман са 0,5 М НаОХ за више од 5 МВ да бисте осигурали да мембрана постигне равнотежу.

5.2.2: Под истом брзином протока, даље пре-третирати пуфером за равнотежу (1× ПБС) за више од 5 МВ да би се осигурало да мембрана постигне равнотежу.

5.3 Процес хроматографије

5.3.1

Подесите улазни проток на 5–10 МВ/мин и претходно-третирајте пуфером за еквилибрацију више од 5 МВ док мембрана не достигне равнотежу.

5.3.2

Након што се узорак претходно-филтрира кроз филтер од 0,22 μм, учитајте узорак док се пуњење не заврши или док се не достигне капацитет пуњења хроматографије.

5.3.3

Испирати пуфером за еквилибрацију више од 10 МВ док се УВ апсорбанца не смањи на основни ниво.

5.3.4

Користите градијентно елуирање или линеарно елуирање у складу са дизајном процеса и по потреби сакупљајте узорке у фракцијама.

5.4,ЦИП пост{1}}третман – ЦИП уређаја за мембранску хроматографију

5.4.1

Подесите улазни проток на 5–10 МВ/мин и извршите третман-на-мјесту (ЦИП) са 0,5 М НаОХ за више од 10 МВ док УВ апсорбанца не падне испод основне линије.

5.4.2

Након циркулационог прања у трајању од 30 минута, пређите на прање водом док пХ не буде између 7-8, а затим наставите са чишћењем са 20% етанолом док проводљивост не остане скоро константна.

5.5, Складиштење мембранске хроматографије:

Након употребе и завршетка ЦИП-а, мембрански модул се може уклонити и чувати намакањем у 20% етанолу, или чувати онлајн на собној температури у 20% раствору етанола. 20% раствор етанола треба периодично прегледати и заменити.

 

6. Информације о наручивању

Филтер за капсулу за хроматографску хроматографију типа ДЕАЕ-

	Лабораторијска{0}}скала	мале размере	Пилот скала	Обим производње
Модел производа	ИЕКСД0002ЕС	ИЕКСД0050ЕС	ИЕКСД0400ЕС	ИЕКСД5000ЕС
Запремина мембране	0,2мл	5мл	400мл	5L

Popularne oznake: Деае слаба анионска мембранска хроматографија, Кина, добављачи, произвођачи, фабрика, велепродаја, расути, на лагеру, бесплатни узорак