Вакцина за честице вируса и његов поступак пречишћавања низводно

Вакцина налик вирусу (ВЛП) је технологија вакцине која се заснива на структури вируса, али не садржи вирусне генетске материјале. Стимулишу снажан имуни одговор тако што ће опонашати морфологију и површинске антигене природних вируса и пружити већу сигурност због њихове неспособности да се реплицирају. ВЛП вакцине су боља алтернатива традиционалним вакцинама (уживо атенуирани и инактивирани). ВЛП вакцина не може се поновити у телу, тако да је погодан за све, укључујући труднице или оне са компромитованим имунолошким системима. Поред тога, капсидни протеини (укључујући и друге структурне протеине) од вируса са сегментираним геномима, као што су вируси грипа, афричке коње вируса и блуеноонгуе вируси, могу се користити и за развој ВЛП вакцина без бриге о генетском рекомбинацију. Друго, ВЛПС су у стању да опонашају структуру стварних вируса, за разлику од инактивираних вакцина, чији се структурни протеини могу модификовати током имуногене умањење вредности.

 

Сл. 1. Механизам формације ВЛПС и химерни ВЛПС

 

Карактеристике ВЛП Вакцине

1. Структура слична природним вирусима: ВЛПС се самосветују вирусним једним или више структуралних протеина (попут капсидних протеина), а њихова величина и облик слични су стварним вирусима.

2 Неинфективно: не садржи вирусни геномом, не може да реплицира или изазива болест.

3. Висока имуногеност: зрнат структуру може ефикасно препознати имуни систем и активирати одговоре Б ћелије и Т ћелија. Може изазвати неутрализацију антитела и ћелијски имунитет (нпр. ХИВ, ХПВ вакцине).

4. Висока сигурност: Погодно за људе са ниском имунолошком функцијом (као што је хепатитис Б ВЛП вакцина).

 

Сл. 2 Доступне ВЛП вакцине

 

ВЛП систем за производњу вакцина

ВЛПС се могу произвести кроз разне експресионе системе, уобичајене платформе укључују:

 

1. Инсецт Целл-Бацуловирус систем:

Предности: Високи принос, ниска цена, погодна за сложену склоп протеина.

Примена: ХПВ вакцина, вакцина Ебола.

 

2 ћелије сисара (нпр. Хек293 ћелије):

Предности: Пост-транслационе модификације су ближе људима и погодне за обавезне ВЛП (као што су вакцине против грипа).

 

3. Системи квасца (нпр. Пицхиа пасторис):

Предности: Брзи, ниски трошак, коришћен је у вакцини са хепатитисом Б.

 

4. Биљни системи (нпр. Дуван хлоропласт):

Еколошки прихватљиви и скалабилни, у оквиру развоја (нпр. Норовирус ВЛП вакцина).

 

Процес пречишћавања низводно влп вакцине

Разноликост ВЛПС експресијских система доводи до некреветности процеса пречишћавања низводно.

 

 

Сл. 3 Генерал Цхарт Флов Процесс Процесс

 

Жарина и појашњење:

У свим врстама културе, прописујући ћелијској култури, постоји велики број честица вируса, као и многих крхотина ћелијских ткива, метаболичким производима и другим нечистоћима, чинећи културу средње облачно или полу-облачно, ако се концентрација концентрише мембрана ултрафилтрације, а ултрафилтрацијска мембрана се не може довршити и ултрафилтрацијска мембрана је ултрафилтрацијска мембрана. Стога се мора прво разјаснити пре концентрације, да бисте уклонили велике честице у медијуму културе, тако да постане прозиран или транспарентно решење, а концентрација културе медијума може да учини процес концентрације нормално и обезбеди радни век ултрафилтрацијске мембране. Појашњење пре концентрације културног решења је кључна техничка веза у процесу концентрације.

 

Ефикасан процес појашњења захтева комбинацију високог капацитета за уклањање чврстих честица, високих приноса производа, једноставан степен и заштита на низводно оперативне јединице.

 

Метод

Центрифугирање: Диференцијална центрифугација уклања велике честице.

Дееп филтрација: Користите вишестарски филтер (нпр. 1,2 μм → 0. 45μм) да бисте разјаснили супернатант.

Филтрација тангенцијалних протока (ТФФ): Погодно за масовну производњу, концентрише узорке и уклања мале честице нечистоћа.

 

Међутим, ако је скала култивације превелика, центрифугирање траје дуго времена, биће потребан велики број дубоких мембрана филтера, па су трошкови потрошног материјала увелике повећали. Истовремено, висока густина ћелијске културе смањиће оптерећење дубоких мембрана филтра, што је резултирало повећаним трошковима и прекомерним разблажењем производа.

 

Постоје две врсте ТФФ мембранских компоненти: равна касета и шупље влакна. Филтрација тангенцијалних протока (ТФФ) се покреће на разлику на транскбрану. Супстанце и нечистоће које су мање од мембранске поре пролазе кроз мембрану, док су нечистоће попут ћелија са већим честицама заробљене. Величина пора коришћена за микрофилтрацију је {{0}}. 45 / 0,22 ум. Шупље влакна може директно обрадити високу чврсту садржај, као што је медијум за културу високог густине, може да елиминише центрифугирање и кораке пре филтрирања, мање корака, мембране се може више пута користити кроз чишћење, смањење трошкова опреме и оперативних аутоматизованих производних потреба.

 

Концентрација ултрафилтрације (ТФФ):

Циљ: Смањити количину хроматографског третмана, побољшати хроматографску ефикасност и заштити хроматографску колону.

Генерално, ултрафилтрација (ТФФ) може концентрисати више од 100 пута ВЛП-а, а стопа уклањања хетеропротеина може достићи 99%. Међу њима, шупља технологија филтрације за филтрацију влакана има предности благе и ниске силе смицања, није лако прикључити, флексибилан рад, дугог живота, ниску цену и лако појачање, тако да се препоручује одабир шупље влакна за концентровану и пречишћену ВЛП.

 

Када се метода ултрафилтрације користи за концентрацију и пречишћавање, веома је важно да одаберете величину порапада за праву мембрану, која директно одређује ефикасност и квалитет концентрације. С једне стране, потребно је одабрати отвор за мембрану да ефикасно заробите циљне молекуле како би се осигурао принос, а с друге стране, ефекат уклањања и брзина прераде хетеропротеина треба у потпуности размотрити. Стога је најбољи принцип одабрати мембрану са највећом величином пора која може заробити циљни молекул и покушати да одаберете мембрану филтера са униформним дистрибуцијом величине пора.

 

Примарно пречишћавање:

1. Метода падавина

Полиетилен гликол (ПЕГ) падавине: селективна падавина ВЛПС захтева оптимизовану концентрацију ПЕГ и концентрацију соли до приноса и чистоће.

 

2 хроматографија

Хроматографија афинитета:

Хепарин афинитет: Коришћење ВЛПС својстава површинских негативних набоја (нпр. ХПВ ВЛП).

Кроматографија за борбу против антитела: висока специфичност, али скупа.

ИОН Екцханге хроматографија (ИЕКС): Изаберите Анион Екцханге (нпр. КОТИОН) или ЦАТ БРЗИНА (нпр. СП ступца) у зависности од карактеристика на основу ВЛП-а и оптимизирајући пХ и градијент соли да бисте избегли агрегацију честица.

Хроматографија хидрофобне интеракције (ХИЦ): На основу ВЛПС површине хидрофобности, погодним за неке не-капсулиране ВЛП.

 

Фино пречишћавање:

Кроматографија на молекуларно искључивање (сец, гел филтрација):

Уклањање протеина преосталих домаћина, нуклеинске киселине или агрегата, праћено заменом пуфера. Висока резолуција, али ниски ток, често се користи као коначни корак за пречишћавање.

 

Хроматографија на више начина:

На пример, серије серије Цапто Цоре, у комбинацији са ионским разменом и молекуларним просијућим ефектом, може уклонити различите нечистоће у једном кораку.

 

Неактивација вируса / уклањање нуклеинских киселина (ако је потребно):

Третмани нуклеаза: као што је бензоназа деградирати ДНК / РНА.

УФ / ДФ: Координира ТФФ систем за уклањање малих фрагмената нуклеинских киселина и ензима.

 

Концентрација и припрема:

Филтрација тангенцијалних протока (ТФФ):

Концентрирајте се на циљање титра, док мењате пуфере (као што су ПБС или пуфери за формулације).

 

Стерилна филтрација:

0.. 22μм мембранска филтрација осигурава стерилитет.

 

Типичан случај

Следећи су процеси пречишћавања низводно за типичне ВЛП вакцине.

 

 

О Гуидлинг-у

Водичка технологија је производно оријентисано и високотехнолошко предузеће које се фокусира на појашњење, раздвајање и пречишћавање биофармација. Производи се широко користе у процесу филтрације МАБ, вакцине, дијагнозе, крвним производима, серумом, ендотоксином и другим биолошким производима; Водичка технологија има "касете филтра филтра и филтра за филтрирање тангенцијалних протока", "шупље мембрана влакна", "Дееп мембрана", "Дееп мембрана", "Стерилизацијски филтер", "Центрифугацијски филтрирни уређаји", "Центрифугал филтер уређаја" и остали производи и имају велики број производа за производњу за једнократну употребу у систем за производњу и производњу. Водичка технологија се радује сарадњи са вама!