Мембранска технологија и појашњење вакцине (Ⅰ)
Вакцине долазе из различитих извора, укључујући екстракте ткива, бактеријске ћелије, вирусне честице, протеине и нуклеинске киселине које производе рекомбинантне ћелије сисара, ћелије квасца и инсеката.
Најчешћи начин производње вакцине заснива се на почетном процесу ферментације након чега следи пречишћавање. Производња вакцине је сложен процес који укључује много различитих корака и процеса. Одабир правог метода пречишћавања је кључан за постизање жељене чистоће финалног производа. Појашњење вакцина је важан корак који има значајан утицај на опоравак производа и накнадно пречишћавање. За разјашњавање вакцина може се користити неколико техника. Избор методе сакупљања и опреме зависи од типа батерије, природе производа који се сакупља и процесне течности. Ове технике укључују мембранску филтрацију (микрофилтрацију, филтрацију тангенцијалног протока), центрифугирање и дубинску филтрацију (нормална филтрација протока). Из дугог искуства, разјашњење жетве вакцине обично се постиже центрифугирањем након чега следи дубока филтрација.
Последњих година, технике засноване на мембрани су добиле на значају у разјашњењу вакцина. Упстреам процеси све више користе технологије за једнократну употребу, тако да се стратегије жетве морају променити. Овај чланак пружа свеобухватан преглед различитих технологија заснованих на мембрани и њихове примене у разјашњавању вакцина.
01 Увод
Вакцине су критична компонента наше превенције заразних болести, које остају шокантан узрок смрти. Између 2 и 3 милиона људи се сваке године спаси од дифтерије, тетануса, великог кашља и морбила захваљујући имунизацији. Вакцине покривају широк спектар, од малих рекомбинантних протеина до целих вирусних честица и целих бактерија. Могу их производити различити системи: јаја, ћелије сисара, бактерије, итд. Због сложености и разноликости вакцина, тренутно не постоји главни протокол или шаблон за пречишћавање, упркос растућем интересовању за платформе за вакцине.
Обично се процес вакцинације може поделити на три дела: узводно (производња и бистрење), низводно лечење (пречишћавање укључујући ултрафилтрацију, хроматографију и хемијски третман) и формулацију (операције коначног пуњења). Независно од производног система, бистрење (почетно уклањање нежељених супстанци) игра кључну улогу у одређивању снажног процеса пречишћавања. Одговарајући корак бистрења углавном уклања целе ћелије, ћелијске остатке, колоиде и велике агрегате како би се смањио терет даље обраде. У неким случајевима, бистрење такође може да смањи нерастворљиве нечистоће, протеине ћелије домаћина (ХЦП) и нуклеинске киселине ћелије домаћина. Као и сваки други корак пречишћавања, корак бистрења треба да буде оптимизован да би се постигао максимални принос и чистоћа производа уз прилагођавање специфичности и производним ограничењима вакцине.
Због хетерогености типова вакцина, за појашњење се користе различите технике, укључујући центрифугирање или филтрацију (Табела 1).
Обично је потребно неколико серија операција да би се постигло жељено појашњење. Прва операција је дизајнирана за уклањање већих честица (примарно бистрење), а друга операција је дизајнирана за уклањање колоида и других субмикронских честица (секундарно бистрење). Центрифугирање при малој брзини служи као једнократна опција за разјашњавање, омогућавајући ћелијама и ћелијским остацима да се уклоне преципитацијом. Центрифугирање може да поднесе велика чврста оптерећења и широко се користи у серијском или континуираном режиму и центрифугама са дисковима. Захтева високе капиталне инвестиције и трошкове одржавања, и суочава се са изазовима у повећању због недостатка поузданог модела смањења. Међутим, неки комерцијални произвођачи вакцина користе центрифуге у великој производњи која укључује велике количине обраде и више производних активности.
Филтрација за бистрење може да се изведе филтрацијом нормалног протока (НФФ, такође позната као филтрација у мртвим крајевима) или филтрацијом тангенцијалног протока (ТФФ, такође позната као филтрација унакрсног тока). Постоје и специфични режими филтера (дубоки филтери) који садрже позитивно наелектрисане материјале и филтер АИДС који побољшавају задржавање ћелијских остатака, колоида и негативно наелектрисаних нежељених компоненти.
Мембрански филтери задржавају честице искључењем величине и немају висок капацитет задржавања прљавштине, тако да су погодни за секундарне кораке бистрења. И дубински и мембрански филтери се лако скалирају и имплементирају (једноставан дизајн система). За разлику од НФФ, ТФФ се углавном користи за примарно бистрење (микрофилтрација). Мембране са граничним опсегом од 0.1-0.65 μм (пожељно са отвореним каналом) су успешно коришћене за задржавање ћелија, остатака ћелија и других великих загађивача. Већина ТФФ опреме је линеарно скалабилна и поново употребљива након чишћења, што значајно смањује трошкове потрошног материјала за корак.
Корак разјашњавања лежи између процеса узводно и низводно и понекад се занемарује током развоја процеса вакцине јер су време и ресурси приоритет за друге кораке пречишћавања, као што су хроматографија или центрифугирање у градијенту густине.
Чак и патенти за процесе производње вакцина често изостављају корак разјашњења. Ефикасност бистрења директно утиче на перформансе процеса који се наставља низводно. Лоше оптимизован корак бистрења може негативно утицати на капацитет стерилизованог филтера или може скратити радни век хроматографске смоле. Данас, строжа регулаторна очекивања имају тенденцију да натерају произвођаче вакцина да производе чистије, добро окарактерисане, али приступачне вакцине. У овом случају, сваком кораку треба посветити пажњу коју заслужује. Тренутни трендови сугеришу да се претходни процес креће ка „чистијем“ систему експресије (тј. ћелије култивисане у медијуму без серума замењују јаја) са повећаном продуктивношћу и већом густином ћелија.
Низводни процеси пречишћавања се поједностављују и поједностављују како би се повећала чистоћа финалног производа. Да би се решиле ове промене, корак разјашњења не може постати уско грло. У овом случају, технологија филтрације се сусреће са новим изазовом разјашњења, решавајући питања повећане флексибилности процеса, могућности једнократне употребе и смањених трошкова улагања.
02 Појашњење вирусних вакцина
Неколико врста метода бистрења, било самостално или у комбинацији, успешно је коришћено да би се разјаснила жетва на крају вакцине.
Пилот скала:1-20Л, производна скала: више од 20Л
2.1 Мере опреза за појашњење вакцине против вируса
Многе вакцине садрже све или део вирусних честица за формирање имунитета против вирусне инфекције. Они генерално спадају у четири широке категорије:
Жива атенуирана вакцина (ЛАВ), која се заснива на ослабљеном соју вируса да би се смањила његова вирулентност. Ослабљени вируси могу да се размножавају у телу, али нису патогени.
- Вакцине са инактивираним вирусом (ИВ), које садрже хемијски или ултраљубичастим инактивираним вирусима за уклањање инфективности. Вирусне честице могу бити комплетне, подељене или пречишћене (само антигени протеини).
- Вакцина вирусног вектора (ВВ) је активан, непатоген вирус који представља антиген патогеног вируса. Ове недавно развијене структуре се такође користе за апликације генске терапије.
Вакцине налик вирусима (ВЛПс), специфична класа вирусних подјединица вакцина које опонашају укупну структуру вирусних честица, али не садрже инфективни генетски материјал.
У већини случајева, вирусне честице су потпуно нетакнуте током корака бистрења, чак и током лизе вирусне вакцине (цепање се обично врши низводно, у пречишћенијем окружењу).
Главни изазов појашњења вируса је опоравак вирусних честица високог приноса уз ефикасно уклањање остатака ћелија, великих агрегата и нерастворљивих загађивача. Као што је описано у следећим одељцима, постоји неколико фактора који могу изазвати деградацију или губитак вируса. Поред тога, може бити тешко ослонити се на принос вируса због велике варијабилности вирусних квантитативних метода у овој фази процеса, посебно за вакцине против ЛАВ и ВВ. За ове вакцине, принос вируса се често процењује коришћењем тестова инфективности као што су тест плака или ТЦИД 50 тест. Чињеница да нека од прикупљених једињења могу да ометају способност вируса да инфицира индикационе ћелије повећава варијабилност овог квантитативног приступа.
2.2 Стратегија разјашњења вакцине против вируса
Вирусне вакцине се веома разликују по величини, структури, облику и експресионим системима (Табела 3).
Као резултат тога, генерално не постоји шаблон за низводне процесе, посебно кораке појашњења. У теорији, све доступне технике (центрифугирање при малим брзинама, микрофилтрација ТФФ, НФФ) могу бити одабране и потенцијално комбиноване да би се разјаснио вирус. У ствари, на успех метода бистрења утичу систем експресије и физичко-хемијска својства укључених вируса.
Recently, the high cell density process of viral vaccines is being explored. High cell density processes add to the challenge of clarification. Many treatment methods are by preconditioning, i.e. polymer-induced flocculation, precipitation, alternating TFF, etc. For example, Tomic et al. describe a method for high cell density collection (>{{0}} ћелија /мл) метода бистрења, коришћењем катјонских полимера, смањила је површину дубоке филтрације за 4 пута у поређењу са традиционалним методама. Ова техника омогућава бербу ферментора великог капацитета без употребе центрифуга. Слично, Риске ет ал. показало је да је третман хитозаном 40 Л ћелијских култура (0,02%) које садрже 1.4-2.6% чврсте материје довео до 7-путоструког повећања апсолутног капацитета филтера након дубоке филтрације.
Они такође помињу да се чини да хитозан побољшава ефикасност бистрења флокулацијом субмикронских честица, које се обично таложе у центрифугама. Методе претходног третмана и флокулације ће вероватно и даље бити део будућих појашњења филтрације вакцине. Пенетанти, укључујући шећере, гликоле и аминокиселине, првенствено флокулирају вирусе. Вирусна флокулација осмотским раствором праћена 0.2µ микрофилтрацијом може се користити као свеобухватан процес за пречишћавање вируса. Пенетанти могу стимулисати агрегацију вируса смањењем хидратантног слоја око честица да би флокулирали хидрофобне некапсулиране вирусне честице и инкапсулиране вирусне честице. Иако се показало да пенетранти флокулирају вирусе, метода има потенцијал да буде платформа за будуће пречишћавање вакцине, а њена изводљивост у пилот или масовном пречишћавању вакцине није доказана. Метода предтретмана флокулацијом, која ће вероватно и даље бити део будућег бистрења филтера вакцине, изводи се у ферментору од 2Л. Да би се потенцијално користиле у великим производним операцијама, ове методе морају бити валидиране на пилот и производним скалама.
2.2.1 Изражавање утицаја система
Метода бистрења углавном зависи од типа претходног процеса и експресионог система, који одређује врсту и ниво загађивача који се уклањају. Вирусне вакцине се обично производе у пилећим ембрионима путем континуираних ћелијских линија сисара или птица или ћелија бакуловируса/инсеката, које су сложенији систем експресије. Неке врсте ВЛП-а могу такође бити произведене другим хетерологним експресионим системима (бактерије, квасац, биљне ћелије).
2.2.1.1 Вирус произведен у пилећем ембриону
Вакцине се производе у јајима деценијама. Овај рад датира из 1931. године, када су Воодруфф и Гоод Пастуре успешно користили хорио-алантоичну мембрану плодних јаја као супстрат за раст вируса. Данас се многе хумане и ветеринарске вакцине још увек производе коришћењем овог древног процеса. Најпознатија је вероватно вакцина против сезонског грипа. Принцип је да се кокошја јаја инокулирају вирусима од интереса, а затим се реплицирају у хорио-алантоичној мембрани. Након репродукције, алантоична течност богата вирусним честицама се сакупља и пречишћава.
Алантоична течност је изазовна храна за бистрење. Висок садржај минерала и протеина (укључујући овалбумин) даје му висок вискозитет. Алантоична течност такође садржи есенцијална једињења ткива из пилећих ембриона, као што су перје, кљунови, крвни судови или крвне ћелије. Због високог садржаја чврстих материја, центрифугирање при малој брзини је пожељна опција за примарно бистрење, што обично резултира стопом опоравка од око 70%. Међутим, могуће је и примарно бистрење коришћењем техника филтрације. За НФФ, дубоки филтери на бази полипропилена и целулозе имају добре могућности сакупљања алантоичне течности. Површински филтери направљени од дубинских филтера на бази полипропилена или целулозе могу имати капацитет од 150-210 Л/м² и смањити замућеност протока хране до 3 пута. Отворени доводни канал ТФФ уређај је такође погодан за пречишћавање алантоичне течности, јер је уређај погоднији за минимални губитак притиска кроз доводни канал, чиме се смањује блокада канала.
Корак секундарног појашњења може се лако урадити са НФФ. Комбинација материјала од полипропилена, целулозе и стаклених влакана генерално показује добру ефикасност, а алтернатива секундарном кораку бистрења је употреба ТФФ-а и {{0}}.65 μм или 0,45 μм микрофилтрационог мембранског уређаја и управљање осмотским флуксом контролу. У овом кораку може се користити ТФФ уређај отвореног канала са хидрофилном ПВДФ или хидрофилном ПЕС мембраном.
Важно је напоменути да вирусне честице могу бити повезане са нерастворљивим остацима материјала, што може значајно смањити производњу вируса током бистрења. Употреба раствора соли може смањити ову повезаност између вируса грипа и чврстих фрагмената, што резултира отприлике двоструким повећањем производње без утицаја на интегритет вирусних честица.
2.2.1.2 Вируси произведени у узастопним ћелијским линијама сисара и птица
Недавно су се неке вирусне вакцине удаљиле од процеса заснованих на јајима у корист процеса заснованих на ћелијској култури (посебно за вакцине против грипа). Главни разлог за ову промјену је спречавање проблема са производњом вакцина који су повезани са ембрионалним јајима (тј. недостатак залиха јаја који може настати у случају било какве епидемије болести перади). Као резултат тога, многе врсте вакцина и вирусних вектора се тренутно развијају коришћењем непрекидних ћелијских линија од сисара или птица, конвенционалних ћелијских линија (као што су Веро, МДЦК или ХЕК293 ћелијске линије) или власничких ћелијских линија.
У зависности од система експресије, вирус може остати унутар ћелије, што захтева корак лизе ћелије, или може остати ван ћелије (лиза или пупољавање). Чврсто оптерећење и растворљиви садржај добијен из ћелијске културе су много чистији од алантоичне течне фазе. Као резултат тога, НФФ технологија је лакша за имплементацију, а капацитет је знатно већи. Међутим, капацитет филтрације је у великој мери зависан од услова ћелијске културе, као што су густина ћелија или виталност ћелија при берби. Ови параметри утичу на количину ћелијских остатака и макроагрегата који могу зачепити дубоке филтере и мембране, што резултира смањеним капацитетом.
Тхомассен и остали пружају добар пример појашњења НФФ-а. Користи се у процесу производње инактивираног полиовируса (ИПВ). Веро ћелије култивисане на микроносачима коришћене су за пролиферацију вируса са густином ћелија од {{0}}.78 к 106 ћелија/мл ТОИ. Сито од нерђајућег челика од 75 μм се користи за претходно бистрење да би се уклонили микроносачи из жетве. Двослојно оцењивање се разјашњава коришћењем дубинског филтера густине (0.2-2.0μм), након чега следи филтер стерилизованог квалитета.
Одабрана скалабилна јединица за једнократну употребу успешно је коришћена за припрему Сабин ИПВ материјала за клиничко испитивање на скали од 350 Л. У зависности од серотипа вируса, добија се стопа опоравка од вируса од 86 до 96 процената.
2.2.1.3 Бакуловирус/честице сличне вирусу произведене у систему ћелија инсеката
Разматрање система бакуловируса/ћелијских ћелија инсеката за производњу вакцина великих размера је релативно ново, али привлачи све веће интересовање у области вирусних вектора и ВЛП-а. Главна предност овог система је што укључује краткотрајну (нема потребе за успостављањем ћелијских линија) и безбедну (без комплетне вирусне ДНК) производњу. Постоје и неки недостаци, као што је потреба за уклањањем бакуловируса и стабилност производа.
Церварик, ВЛП вакцина против инфекције хуманим папилома вирусом коју производи ГлакоСмитхКлине, прва је људска вакцина која се комерцијално производи у ћелијама инсеката. Одређени број вакцина заснованих на ВЛП-овима и рААВ векторима произведеним у ћелијама инсеката зараженим бакуловирусом је тренутно у развоју. Ћелијске линије инсеката изведене из јесењег црва Сподоптера фругиперда (Сф9 и Сф21) и купусног црва Трицхоплусиа ни (БТИ-ТН5Б1-4 ћелије) се најчешће користе због њихове способности да расту у суспензији, што поједностављује узводно појачање процес. Након раста до жељене густине живих ћелија, ове ћелије су инфициране рекомбинантним бакуловирусом у фази експоненцијалног раста ћелија ради експресије протеина. Велики геном бакуловируса омогућава експресију пет или више различитих протеина, што одговара сложености ВЛП и вирусних вектора.
Бернард и др. описао низводни процес културе ћелија инсеката. Процес је веома варијабилан, што одражава разноликост протеина произведених овом техником. На први корак секвенце пречишћавања у великој мери утичу карактеристике запремине биореактора (тј. густина ћелија и виталност), или природа ослобађања производа (лучи се пупањем или лизом ћелије). Бакуловирусна инфекција ћелија инсеката може да изазове лизу ћелија у року од 3-5 дана. Уништавање ћелија може довести до повећања протеолитичке активности и других фактора животне средине који могу довести до деградације рекомбинантних протеина.
Било је покушаја да се развију бакуловируси са мањом способношћу да иницирају ћелијску лизу. Бакуловирус лизира мање од 10 процената заражених инсеката.
Лиза ћелија се може извести помоћу различитих метода, као што су замрзавање-одмрзавање, детерџенти, хомогенизатори или ултразвучни третман. Ћелије инсеката немају ћелијски зид и стога се брзо растварају. Иако је ултразвучни третман пријављен у многим процесима на клупи, ретко се користи у експерименталном или комерцијалном обиму. Најчешћи метод је коришћење хомогенизатора за уништавање ћелија у присуству детерџента ниске концентрације (0.1% Тритон Кс-100 или НП-40). Употреба детерџената и микрофлуидизација или хомогенизација осмотског утицаја успешно су примењени у многим великим производним процесима. Обично се ћелије инсеката суспендују у пуферима за лизу (50 мМ ТРИС пХ7,7, 300 мМ НаЦл, 5% глицерол, 0,2 мМ ПМСФ и инхибитори протеазе), током чега Тритон-Кс100 се додаје до коначне концентрације од 0,1%, након чега следи благи ултразвук или микрофлуидизација. Смеша се затим центрифугира да би се уклониле нерастворљиве честице.
У овој фази, лизат може изгледати веома замућен и тешко га је филтрирати помоћу филтера 0.45 μм. Понекад се могу приметити губици до 30% током корака бистрења пиролизе. Додавање бензоензима у фази цепања помаже у решавању проблема филтрације. Чишћење ћелија са фосфатним пуфером раствора соли након жетве и брзог „замрзавања-одмрзавања“ у високој соли (500 мМ НаЦл) која садржи пуфер за пуцање помаже да се уклоне агрегати.
Појашњење ВЛП-ова и вирусних вектора које производе ћелије инсеката дешава се након ћелијске лизе (хемијским или механичким третманом), која ослобађа не само вирусне честице већ и велике количине ћелијске нуклеинске киселине. Ћелије инсеката могу да расту при великој густини ћелија, од 1-9.10 6 ћелија/мл. Према томе, корак бистрења треба да се бави великом густином ћелија, високим садржајем нуклеинске киселине и, ако је могуће, уклањањем честица бакуловируса. Да ствар буде компликованија, ВЛП-ови или вирусни вектори и бакуловируси могу имати сличне величине (бакуловируси су 60-80 нанометара широки и 300-400 нанометара дугачки). Због велике густине ћелија, центрифугирање је деценијама била пожељна техника за примарно бистрење. Међутим, чини се да су мембрански процеси веома атрактивна алтернатива јер је скалабилност лако дефинисати.
Дубоки филтери су ефикасно коришћени у низводном процесу трослојних честица сличних ротавирусу. На лабораторијском нивоу, метода ултрацентрифугирања градијента густине ЦсЦл се често користи за пречишћавање ових сложених честица. Истраживачи су проценили не само корак бистрења дубоког филтера, већ и цео низводни процес (цепање Тритон Кс-100 и дубока филтрација, праћено ултрафилтрацијом и искључењем величине честица). Резултати показују да принос градијента густине ЦсЦл може достићи 37%.
Ултрацентрифугална метода је око 10%. Као други пример, шупља влакна од 0,45 μм и фина влакна пречника 500 кДа су коришћена за опоравак и концентрисање честица сличних ХИВ-у произведених у ћелијама инсеката. У овој студији, сила смицања шупљих влакана је оптимизована на основу интегритета ћелије. Резултати Установљен је процес ниске силе смицања да би се заменило ултрацентрифугирање градијента столног шећера.
Процес има потенцијал да се примени на масовну производњу. Дубоки филтери су такође успешно коришћени у производњи рекомбинантних адено-повезаних вируса. Лиза ћелија је изведена механичким ометачем ћелија са два клипа, након чега је уследио третман нуклеазом. У кораку бистрења, коришћен је дубок филтер елемент од стаклених влакана од 1,2 μм, а затим два слоја од 0, 8 μм хидрофилног ПЕС-а и 0, 2 μм хидрофилног ПЕС-а. Филтери пропорционалне величине се користе за процесне серије од мањих до 200 Л величина. Дубоки филтери су успешно коришћени, а такође се наводи да су оцене ТФФ са равним филмовима или шупљим влакнима од 0,2 µм или 0,45 µм такође веома ефикасне.
Студија Тецнологица (ИБЕТ) на Институту за експерименталну биологију Оеирас у Португалу користила је НФФ за појашњење хепатитиса Ц ВЛП-а експримираног бакуловирусима без центрифугирања. Полипропиленски филтери номинално оцењених (10,5,0.6 и 0.3μм) филтери се користе за разјашњавање сакупљања ВЛП-а. Исти филтери са 0.6μм и 0.3μм оценама пора користе се за филтрацију у ВЛП центрима за прикупљање. Сви проучавани филтрати су тестирани на стопе опоравка ХЦВ-ВЛП и упоређене су препоручене методе филтрације. Резултати су приказани у табели 4.
Резултати су показали да филтер од 5μм-0.3μм има највећи опоравак производа (100%) за директно сакупљену храну за хепатитис Ц ВЛП. Полипропиленски филтер од 0,6 μм имао је највећи опоравак производа (82%) за централно напајање, а клиренс ДНК ћелије домаћина био је око 70%.
2.2.1.4 Честице сличне вирусу произведене у системима бактерија или квасца
Тип методе бистрења за ВЛП вакцине експримиране у бактеријским или квасним системима зависи од ослобађања ВЛП у екстрацелуларне медијаторе. Ако ВЛП-ови не могу да се излуче ефикасно, може бити потребна лиза ћелија или други кораци екстракције пре стварног корака бистрења. Иако је ово златни стандард у индустрији бистрења протеина, центрифугирању (континуирано или серијско) изражено у системима на бази бактерија или квасца, у новије време, мембрански процеси су постали веома атрактивна алтернатива због своје лакоће скалабилности и компатибилности са једнократном употребом. третмани.
Рихтер и Топел објашњавају употребу центрифугирања, ТФФ-а или комбинације оба када се припремају ВЛП произведени у бистреној Е. цоли. У њиховом раду коришћене су 0.45м ТФФ мембране за разблаживање и бистрење хомогенизованих хомогената Е. цоли на температури од 5 степени. Они такође примећују да је ТФФ заснован на мембрани погодан за руковање жетвама високог вискозитета, по могућству коришћењем ТФФ јединица са конфигурацијом отвореног канала.
Центрифугално бистрење је такође оцењено као алтернатива ТФФ. У овом случају, добијени хомогенат није разблажен и центрифугиран на 4 степена 105 минута, 10000г. Без преношења меке превлаке, супернатант је изливен из честица и поново центрифугиран на 4 степена и 10.000 г током 60 мин. Супернатант је затим уклоњен из присутних честица, разблажен са ЕБ пуфером (43,89 мМ Трис ХЦл, 6,11 мМ Трис базе, 5,0 мМ ЕДТА, 10% (в/в) Тритон Кс-100) 1:2, и филтриран на стерилном филтер уређају од 0,22 м. Даља обрада. Процес повећања за производњу ове ВЛП вакцине у Е. цоли на скали од 800 Л такође је наводно разјашњен комбинацијом центрифугирања и ТФФ.
Рекомбинантна вакцина против хепатитиса Е ХЕВ 239 је лиценцирана у Кини за имунизацију одраслих од 16 година и више. Антигени вакцине (ВЛП) су експримирани у Е. цоли, а показано је да је повећање процеса производње антигена на скали од 50Л. Производ је екстрахован крековањем Е. цоли и тела инклузије су одвојена од ћелијских фрагмената обичним испирањем са пуфером који садржи 2% Тритон Кс-100 и затим растворена са 4 М хомогенизатором урее. ТФФ разјашњава ВЛП хуманог папилома вируса произведеног у Саццхаромицес церевисиае (15Л). Ћелијски лизат третиран нуклеазом је бистрен микрофилтрацијом унакрсног тока у режиму трансфилтрације користећи филтер од шупљих влакана од 0,65 μм. Исти процес се користи у производњи вакцина. Иако је само неколико вакцина заснованих на ВЛП достигло комерцијалне размере, неколико вакцина заснованих на ВЛП је у развоју, од којих је већина бистрена помоћу центрифугирања или мембранске технологије.
Ограничени утицајем простора, другу половину садржаја поделићемо у следећем поглављу. У следећем чланку ћемо поделити неке случајеве појашњења вакцине и употребе релевантних компоненти мембране.
Као прва компанија у кругу локализације, Гуидлинг Тецхнологи је акумулирала довољно релевантног искуства у разјашњавању вакцина. Гуидлинг Тецхнологи је компанија за развој и производњу која се фокусира на биофармацеутску и ћелијску културу, пречишћавање и сепарацију. Производи се широко користе у биомедицини, дијагнози, индустријској филтрацији течности, детекцији, појашњењу, пречишћавању и процесу концентрације; Гуидлинг је успешно развио ултрафилтрациону центрифугирну цев, ултрафилтрациону/микрофилтрациону мембранску касету, филтер за уклањање вируса, уређај за филтер с тангенцијалним протоком, дубоки мембрански стог, итд., који у потпуности испуњавају сценарије примене биофармацеутске и ћелијске културе.
Наше мембране и мембрански филтери се широко користе у концентрацији, екстракцији и одвајању предфилтрације, микрофилтрације, ултрафилтрације и нанофилтрације. Наш широк спектар производних линија, од малих лабораторијских филтера за једнократну употребу до система за филтрирање производног типа, тестирања стерилности, ферментације, ћелијске културе и још много тога, може задовољити потребе тестирања и производње.