Најчешћа питања о центрифугалним филтерским уређајима
Q1. Неопходно је раздвојити протеине различите молекулске тежине, па колика би разлика требала бити потребна у молекуларној тежини протеина?
О: Величина два протеина треба да се разликује 10 пута или више.
Q2. Може центрифугиратиалфилтерски уређаји да буду стерилисани и отпорни на алкално прање?
О: Може се стерилисати са 75 процената воденог раствора етанола, а мембрана може да издржи 0.1-0.5Н алкално прање натријум хидроксидом.
Q3. Како се носити са тим ако се протеин исталожи током концентрације?
О: Ако се протеин концентрише пребрзо или превише концентрисан, то може изазвати преципитацију протеина, а коначна концентрација протеина након концентрације не би требало да буде превисока; Протеини који су осетљиви на брзину концентрације и имају тенденцију таложења, предложена метода побољшања:
Смањите центрифугалну брзину
Користите ултрафилтрациону мембрану са већом молекулском тежином
Дувајте и усишите концентровану епрувету, а затим центрифугирајте
Q4. Који је могући разлог зашто сецентрифугални филтер уређајине може се центрифугирати?
О: Можете користити око 20 процената воденог раствора етанола за почетно центрифугирање ако се ултрафилтрациона цев не може центрифугирати, јер је ултрафилтрациона мембрана потпуно сува, површина мембране је слабо хидрофобна, а флукс се може обновити након инфилтрације са ниским растварач површинског напона.
Q5. Правилне методе употребе и складиштења центрифугалних филтер уређаја
О: Центрифугални филтер уређаји треба центрифугирати са пречишћеном водом пре употребе да би се проверио њихов интегритет. Након сваке употребе, потребно је да се чува у влажном стању како би се спречило исушивање мембране.
Q6. Како центрифугални филтер уређаји уклањају ендотоксин?
О: Центрифугални филтер уређаји које смо обезбедили нису третирани ендотоксинима, а пошто ендотоксини постоје широко у природи, узорци који захтевају ендотоксине могу се претходно очистити са 0.5Н натријум хидроксидом пре експеримента, а затим опрати са РО вода за уклањање већине ендотоксина.
Q7. Када се концентровани протеин користи за низводну анализу, нађе се да постоји сметња, који је разлог?
О: Уређаји за центрифугални филтер могу се претходно опрати пуферским раствором или пречишћеном водом. Ако сметње и даље постоје, оперите са 0.1Н натријум хидроксидом, а затим исперите пречишћеном водом.
Q8. Iт нађено је да у концентрату након концентрације нема циљног протеина. Који су могући разлози?
О: 1) Почетна концентрација протеина не би требало да буде прениска, ако је концентрација прениска, мембрана можда неће моћи да се задржи.
2) Изаберите одговарајућу величину пора на мембрани. Центрифугална концентрација филтерске цеви припада ћорсокаку филтрације, а величина поре на мембрани је генерално мања од 2 пута или већа од циљног протеина.
3) Изаберите праву центрифугалну брзину
4) Да ли се циљни протеин преципитира
Q9. Пасивациона обрада центрифугалних филтер уређаја
О: Пасивациони предтретман површине центрифугалних филтер уређаја може смањити адсорпцијски губитак протеина на површини мембране, у већини случајева, предтретман колоне пре концентрирања разблаженог протеинског раствора може побољшати опоравак, јер раствор може попунити изложене празна места адсорпције протеина на мембрани и површини, метода пасивације је да се колона претходно натопи великом запремином раствора за пасивизацију дуже од 1 сата, темељно испери колону дестилованом водом, а затим једном центрифугира колону дестилованом водом да бисте потпуно уклонили раствор за пасивизацију који може остати на мембрани, пазите да се мембрана не осуши након пасивације, ако желите да је задржите за будућу употребу, потребно је да додате стерилну дестиловану воду да би мембрана остала влажна., контактирајте наши инжењери за уобичајена решења за пасивизацију.
Q10. Да ли ултрафилтрациона мембрана хијерархијски филтрира молекуле?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 процената ако се користи ултрафилтрациона мембрана од 100 кд, међутим, молекули мањи од величине пора мембране не пролазе потпуно слободно кроз мембрану. Стопа молекуларне ретенције од 67 кд је више од 70 процената, а протеин од 43 кд је такође више од 40 процената одсечен, различите компоненте у мешаном раствору пролазе кроз мембрану не тако једноставно и лако као једнокомпонентни раствор, у пракси , ако желите да изолујете два макромолекула, разлика у молекуларној тежини између њих треба да буде осам пута или више.
Q11. Како ефикасно одвојити велике и мале молекуле ултрафилтрацијом?
О: Због потреба процеса, нечистоће у макромолекулима се уклањају, или се мали молекули уклањају из макромолекула, то је нормално у производњи. Веома је неопходно одабрати одговарајућу величину пора мембране, метод филтрације и услове рада. Уопштено говорећи, ако је МВЦО спецификација мембране одабрана између два протеина, може се постићи релативно идеално раздвајање. Ако је раствор протеина релативно разблажен, рад под ниским притиском ће такође помоћи да се постигну бољи резултати. Изаберите филтрацију тангенцијалног протока и извршите вишеструку дијафилтрацију да бисте добили бољи ефекат раздвајања.
