Утицај ултрафилтрационих мембрана са различитим величинама пора на уклањање ендотоксина

Према нашим статистикама, у већини случајева, избор мембранских касета са отвором мембране од 10 кд или мање може ефикасно пресрести већину ендотоксина, смањити садржај ендотоксина на веома низак ниво и задовољити потребе већине апликација у медицинској и фармацеутској индустрији. Ниво смањења садржаја ендотоксина био је различит са различитом величином пора. С обзиром на овај аспект, урадили смо одређена истраживања, садржај је следећи:

 

Шта је ендотоксин

Ендотоксин, такође познат као липополисахарид, липид А, извор топлоте, је јединствена структура на спољашњем зиду ћелијског зида Грам-негативних бактерија (ГНБ) и представља комплекс високе релативне молекулске тежине. Због хемијске хетерогености ендотоксина, релативна молекулска маса ендотоксина из различитих извора може варирати од хиљада до десетина хиљада, а због амфифилности ендотоксина може формирати асоцијацију у води, а релативна молекулска маса његове асоцијације може достићи 400,000 до 1,000,000.

 

Зашто треба уклонити ендотоксине

1. Улога ендотоксина

Ендотоксин има значајан термогени ефекат на сисаре. Бактерије постају токсичне када умру или се причврсте за друге ћелије. Мала количина ендотоксина (2 нг/кг телесне тежине) убризгана интравенозно може изазвати грозницу, а велике дозе могу изазвати поремећај циркулације и ендотоксински шок. Према одредбама националне фармакопеје, садржај ендотоксина у леку или препарату треба да буде испод прописане границе. На пример, за албумин људске крви, граница садржаја бактеријског ендотоксина треба да буде мања од 2 ЕУ/мЛ у складу са Поступком испитивања за бактеријски ендотоксин биолошких производа. Граница за бактеријске ендотоксине у интерферонима треба да буде мања од 10 ЕУ/мЛ.

 

2. Контаминација ендотоксином

Ендотоксин има очигледне биолошке ефекте и ин виво и ин витро. У системима слободних ћелија, ендотоксини у нанограмским концентрацијама могу утицати на понашање специфичних типова ћелија, па чак и молекула, утичући тако на нормалне физиолошке активности.

Стога је ендотоксин извор загађења већине биолошких материјала, а његово постојање чини да многа биолошка испитивања и тестови на лекове дају хаотичне резултате, што доноси многе потешкоће у производњи.

(1) Контаминација дроге. На пример, велики број западних лекова синтетизованих хемијским методама и традиционални кинески лекови екстраховани из биљака могу бити контаминирани ендотоксинима током њихове синтезе или екстракције.

(2) Сировине за производњу. Разни крвни производи и ћелијски медији такође могу бити мање или више контаминирани током процеса припреме.

(3) Биолошки агенси. На пример, интерферон, интерлеукин или различити терапеутски протеини или пептиди произведени технологијом рекомбинантне ДНК, коришћењем Е. цоли као носиоца експресије у процесу производње, или разним спољним факторима, тешко је избећи контаминацију ендотоксином.

 

Идеја о уклањању ендотоксина ултрафилтрацијом

Због велике релативне молекулске масе ендотоксина, ултрафилтрационе мембране се могу користити за уклањање ендотоксина из воде. Избор величине пора и материјала ултрафилтрационе мембране зависи од релативне молекулске тежине, карактеристика и садржаја пирогена у леку који се третира. Да би се задржало највише пирогена, потребно је користити ултрафилтрациону мембрану са релативном молекулском масом од 5000 или 10000, при чему је притисак током операције већи, а није погодна за неке фармацеутске препарате који садрже велику релативну молекулску масу. компоненте. Пошто ће уклањање пирогена задржати или адсорбовати ефикасне састојке у течности, а принос производа је у великој мери погођен.

Пошто су молекули ендотоксина негативно наелектрисани у неутралним условима, избор позитивно наелектрисаних материјала као што су полисулфон, полиакрилонитрил, полиамид и друге микропорозне филтрационе мембране може побољшати ефекат уклањања молекула ендотоксина. Поред тога, то је такође метода за бојење дијатомејске земље на целулозном филму, а затим адсорбовање позитивног полиелектролита на њега за уклањање ендотоксина. Међутим, на ефекат уклањања ових наелектрисаних микропорозних мембрана на ендотоксин у великој мери утиче пХ. Дубоки филтер Гуидлинг Тецхнологи има дијатомејску земљу, која се може слободно изабрати да ли ће додати позитивно наелектрисање у складу са процесом корисника. У процесу уклањања нечистоћа као што су ћелије, ћелијски остаци и разни протеини, његова унутрашња природна порозна структура може повећати оптерећење мембране филтрацијом.

 

Ефекат уклањања ендотоксина ултрафилтрационих мембрана са различитим величинама пора

 

Овде говоримо о ефекту уклањања ултрафилтрационих мембрана из неколико различитих извора случајева уклањања ендотоксина:

1. Уклањање бактеријског ендотоксина у Схенгмаи ињекцији методом ултрафилтрације

1.1 Увод

Пулсе Ињецтион је врста стерилизованог воденог раствора направљеног од пулсног САН-а кроз реформу облика дозе. Састоји се од црвеног гинсенга, офиопогона и шисандре шисандре. Има благотворно дејство на јачање чи пулса, јачање и стабилизацију дехидрације, стабилизацију крвног притиска, повећање контрактилне силе миокарда и добар клинички ефекат у лечењу кардиоваскуларних и ендокриних болести.

 

1.2 Компоненте мембране

Управљачка ултрафилтрациона мембрана (пресретање релативне молекулске масе 10,30,100 кДа)

 

1.3 Експерименталне методе

1.3.1 Припрема течних међупроизвода који производе пулс

Погледајте процес припреме ињекције Зхонгсхенг Маи у Националном стандарду за лекове (ВС3-Б-2865-98-2011) и његову ревизију (ЗГБ2011-48). Од тежине 100 г црвеног гинсенга, 312 г опхиопогона и 156 г шисандре цхиненсис, црвени гинсенг је екстрахован методом рефлукса етанола, а опхиопогон цхиненсис и сцхисандра цхиненсис су екстраховани методом парне дестилације течног медијума, а добијен је интермедијални медијум 1. сваких 10 мЛ било је еквивалентно 1 г црвеног гинсенга, 3 г офиопогона и 1,5 г шисандре цхиненсис).

 

1.3.2 Ултрафилтрација

Узета је одређена количина течног интермедијера за стварање пулса, пХ је подешен на 7,5 и стављен у систем за ултрафилтрацију третиран водом. Након пресретања релативне молекулске тежине од 10,30,100 кДа полиетарске ултрафилтрационе мембране је ултрафилтрирана, а циклус ултрафилтрације је уравнотежен 60 мин. Након што је ултрафилтрација завршена, израчунате су стопе опоравка (Р) гинсенозида Рг1, Ре, Рб1 и шисандрина А. Методом динамичке замућености квантитативно је мерен садржај бактеријског ендотоксина пре и после ултрафилтрације и израчуната је брзина уклањања бактеријског ендотоксина у течности (К).

Р=Филтер /А примитив ×100%

К= (Ц -Ц филтер) /Ц ×100%

У формули, А је површина врха сваке активне компоненте у ултрафилтрату, А је површина врха сваке активне компоненте у оригиналном раствору лека, Ц је садржај бактеријског ендотоксина у ултрафилтрату, а Ц је садржај бактеријског ендотоксин у оригиналном раствору лека.

 

1.4 Одређивање пермеабилности активних састојака

After ultrafiltration of two kinds of ultrafiltration membranes (with the relative molecular weight of 10, 30, 100kDa retained), the permeability of each active component is shown in Table 1. The results showed that with the increase of membrane pore size, the permeability of effective components increased correspondingly. When the pore size of the membrane reaches 100 kDa, the permeability of the effective components is equal to >. 90%, а сва три активна састојка могу да прођу кроз ултрафилтрациону мембрану од 100 кДа. Површина пика сваке активне компоненте у раствору за ултрафилтрацију мембране од 100 кДа пре и после хроматограма је упоређена помоћу ХПЛЦ, што показује да скоро да није било губитка 4 компоненте.

 

1.5 Студија о ефекту уклањања бактеријског ендотоксина

Промене садржаја бактеријског ендотоксина у течним интермедијерима који производе пулс пре и после ултрафилтрације ултрафилтрационом мембраном приказани су у табели 2. Резултати су показали да се садржај ендотоксина у оригиналној течности значајно смањио после ултрафилтрације са различитом релативном молекулском тежином. После ултрафилтрационе мембране од 100 кДа, садржај ендотоксина у течности био је много нижи од граничне вредности од 5,0ЕУ·мЛ-1 у клиничкој Схенгмаи ињекцији.

1.6 Дискусија

У овом раду, на основу дејства ултрафилтрационе мембране направљене од ПСО, утврђено је да гинсенозид Рг1,Ре,Рб1 и шизандра А готово да немају губитака када је коришћена ултрафилтрациона мембрана са интерцепционом релативном молекулском тежином од 100 кДа, а бактеријски ендотоксини у течност би се могла ефикасно уклонити, испуњавајући захтеве клиничких ограничења. У поређењу са активним угљем за уклањање пирогена, технологија ултрафилтрације не само да може елиминисати проблеме конкурентске адсорпције и засићења адсорпције, већ и гарантовати сигурност убризгавања у великој мери и пружити експерименталну основу за процес припреме Схенгмаи ињекције.

 

2. Утицај пресретне ултрафилтрационе мембране са молекулском тежином од 10 кд на процес уклањања пирогена нормалног физиолошког раствора

 

2.1 Увод

У припреми биолошких производа без пирогена често се сусреће да егзогени ендотоксин изазива висок пироген, а прибор се може решити сувим печењем и намакањем натријум хидроксидом, али припрема раствора великих размера није погодна за горњи третман, и сматра се да се паковање филма с тангенцијалним протоком користи за растворе великих размера за добијање квалификованог садржаја ендотоксина.

 

2.2 Уклањање ендотоксина

2.2.1 Ултрафилтрациона обрада узорака

Бактеријски ендотоксин је много мањи од бактерија, са пречником од око 1-50нм, липид А је мањи, мале величине и мале тежине, а бактеријски ендотоксин има добру отпорност на топлоту. Генерално, паковање мембране за ултрафилтрацију тангенцијалног протока 10 кд се користи за пресретање ендотоксина и провођење тангенцијалног протока кроз раствор.

2.2.3 Експериментални резултати

Гуидлинг Тецхнологи је користила мембранску касету од ПЕС материјала од 10 кд за извођење експеримента микрофилтрације на течности за напајање, а резултати су следећи:

Резултати су показали да ултрафилтрациона мембранска касета са пресретном молекулском тежином од 10 кд произведена Гуидлинг технологијом може ефикасно уклонити ендотоксин и додатно проширити производњу.

 

О Гуидлингу

Гуидлинг Тецхнологи је национално високотехнолошко предузеће које се фокусира на биофармацеутике, ћелијску културу, пречишћавање и концентрацију биомедицине, дијагностику и индустријске течности. Успешно смо развили центрифугалне филтерске уређаје, касете за ултрафилтрацију и микрофилтрацију, филтер за вирусе, ТФФ систем, дубински филтер, шупља влакна, итд. Који у потпуности испуњавају сценарије примене биофармацеутика, ћелијске културе и тако даље. Наше мембране и мембрански филтери се широко користе у концентрацији, екстракцији и одвајању предфилтрације, микрофилтрације, ултрафилтрације и нанофилтрације. Наше бројне линије производа, од малих, за једнократну употребу лабораторијске филтрације до производних система филтрације, тестирања стерилности, ферментације, ћелијске културе и још много тога, задовољавају потребе тестирања и производње. Гуидлинг Тецхнологи се радује сарадњи са вама!