Студија о способности уклањања вируса низводног процеса моноклоналних антитела

Nov 18, 2024

Биотехнолошки производи добијени из ћелијских линија могу бити изложени ризику од контаминације вирусом – степен зависи од бројних фактора, укључујући извор припреме, коришћене сировине, систем производње, реагенсе за пречишћавање и ексципијенте. Проучавање уклањања или инактивације вируса у процесу производње је кључни корак у смањењу потенцијала за јатрогено преношење патогених вируса и на тај начин смањује ризик, који је од суштинског значаја за безбедност производа. Пре него што биолошки производи могу да уђу у клиничка испитивања и буду пласирани на тржиште, њихов производни процес мора бити доказан да има способност уклањања познатих и претпостављених вируса.

Истраживање способности уклањања вируса обично је додавањем познатог вируса индикатора титра у међупроизвод у различитим фазама производње, затим одређивањем заосталог титра вируса у узорку третираном специфичним процесом и коначно проценом вредности лог смањења (ЛРВ) титра вируса. Кораци процеса за ЛРВ Већи или једнаки 4лог10 се генерално сматрају ефикасним корацима за уклањање вируса. Процес са ЛРВ<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

Када се користи метода симулираног производног процеса (редукованог процеса), потребно је осмислити разумно истраживање уклањања/инактивације вируса и план тестирања који се односи на стварни производни процес колико год је то могуће, посебно на ефективне кораке производног процеса. Симулирани процес треба да буде стриктно конзистентан са стварним процесом у смислу параметара испитивања и услова контроле.

Уобичајени вируси индикатори су приказани у табели 1.

У фази испитивања новог лека (ИНД), биотехнолошки производ захтева студије клиренса вируса за најмање 2 модела вируса, обично бирајући један ретровирус (Кс-МуЛВ) и један парвовирус (ММВ). Током фазе апликације за биолошка лиценца (БЛА), студије уклањања вируса се обично спроводе коришћењем 3-5 специфичних/неспецифичних вируса и 3-5 корака процеса се процењују како би се показало да производ има адекватан фактор безбедности од перспектива безбедности вируса. Због различитих смерница у земљи и иностранству, постоје неке разлике у корацима верификације уклањања вируса који се користе за декларације. Шеме верификације уклањања вируса које се најчешће користе у процесу производње мАб приказане су у табели 2.

Од 2009. године, производи моноклонских антитела поднети ФДА за ИНД и БЛА, хроматографију са афинитетом протеина А, низак пХ, хроматографију са изменом ањона АЕКС (режим пенетрације протока), хроматографију измене катјона ЦЕКС (режим везивања - елуције) и валидацију уклањања вируса, искључујући филтрација вируса су најчешће коришћене индикаторске породице вируса, а средња вредност и опсег њихових ефеката уклањања су приказани на слици 1.

За ретровирусе, са изузетком ЦЕКС-а, који има ЛРВ од око 3лог10 (као што је приказано на А-тракасти графикон на слици 1), остали процеси су били робусни (ЛРВ већи или једнак 4лог10). Херпесвируси и ретровируси имају сличне ефекте клиренса и ЛРВ > 4лог10 (као што је приказано на Б-тракасти графикон на слици 1). Мале вирусе без омотача, као што је парвовирус, теже је ефикасно уклонити, отпорни су на хемијски третман и нису лако заробљени филтерима (приказано на графикону Ц-бара на слици 1). Само АЕКС и филтери за мале вирусе били су ефикасни у уклањању парвовирида (просечан ЛРВ > 4лог10).

Процеси приказани на Слици 1 су ПротеинА, АЕКС (режим пенетрације протока), ЦЕКС (режим пратећег елуирања), инактивација ниске пХ вредности („непотпуно „насупрот“ потпуног „уклањања“) и девирусна филтрација великог и малог отвора.

Дистрибуција вредности ЛРВ за сваки процес је приказана на слици 2. Студије са 0 ~ 21ог10 су класификоване као ниска ЛРВ група, а оне са више од 6лог10 су класификоване као група са високим ЛРВ за компаративну анализу.

Није било значајне корелације између ЛРВ вредности процеса Протеин А и балансирања/пуфера за прање, пунила, састава елуента и пХ вредности елуације. Заједнички именитељ ниске ЛРВ групе је да је сировина прилично сложена и може бити да сложена интеракција сировине и пунила негативно утиче на способност хроматографске колоне да уклони вирусе.

Страусс ет ал. показао да пХ и проводљивост АЕКС узорака могу утицати на ЛРВ. Међутим, статистички резултати Миесегаеса и сарадника показали су да, слично као и ПротеинА, ЛРВ АЕКС-а (режим пенетрације протока) није имао значајну корелацију са различитим пуферима, пунилима, пХ и проводљивости, што може бити последица оптимизације пХ и проводљивости. у условима процеса пријављеног случаја.

Уклањање вируса ЦЕКС процесом није довољно робусно. Није било значајне корелације између ЛРВ у групи са високим ЛРВ и пуфера, нивоа искуства или било каквих својстава хроматографске колоне, као што су висина колоне и тип смоле. Међутим, вредности пХ равнотеже/оптерећења и елуације коришћене у студији високог ЛРВ биле су ниже, на 5,3±0.2; У групи са ниским ЛРВ пХ је био 6.0±0.2. Други фактор је да концентрација соли у пуферу такође може изазвати разлику у вредности ЛРВ. Пуфер коришћен у студији са ниским ЛРВ имао је већу концентрацију соли, са просечном концентрацијом од 290±120 мМ у раствору за пуњење/балансирање и 340±70 мМ у елуенту, док су концентрације НаЦл у студији са високим ЛРВ биле 58 ±27 мМ и 183±31 мМ респективно.

У процесу ниске пХ вредности, пХ је кључни параметар процеса, а пХ од 3,8 је довољан да инактивира ретровирус по степену. Група са ниским ЛРВ имала је пХ од 3,9, док је студија са високим ЛРВ имала пХ од 3,4.

И за филтере са малим и са великим отвором, ЛРВ вредност уклањања МуЛВ није била мања од 2лог10, а само 1% студија је било испод 3лог10 (приказано у колонама х и и на слици 2). Укупни клиренс ретровируса помоћу филтера вируса великог отвора био је мањи од оног код филтера вируса са малим отвором (као што је приказано на Ц-бар дијаграму на слици 1). Главни разлог који утиче на резултат уклањања парвовируса су различити типови филтера. У принципу, антивирусно филтрирање може поуздано уклонити вирусе.

Процеси су Протеин А(а), АЕКС начин пенетрације (б), ЦЕКС везивање - начин елуирања (ц), АЕКС везивање Ⅰ режим елуирања (д), Инактивација ниског пХ („непотпуно“ и „потпуно“ чишћење)(е ~ г), и велика величина пора (х) и мала величина пора (и ~ ј) филтрација девируса (где, а ~ и: Ретровирус; ј: Парвовирус).

Континуирани развој и иновације у области низводних биофармацеутских процеса неизбежно ће донети иновације у процени уклањања вируса. Напредак у процесима узводно и низводно – као што су биопроцеси континуираног тока – учинили су неопходним процену и успостављање ефикасних и робусних процеса уклањања вируса. Током континуираног тока, и даље се очекује да ће се кораци као што су инактивација вируса и филтрирање вируса обављати у пакетном режиму. Иако способност уклањања вируса хроматографским процесима у режиму континуираног протока не би требало да се битно разликује од оне код групне обраде, она мора бити подржана подацима.

Из перспективе виролошке безбедности, одлична безбедност биофармацеутске индустрије се у великој мери може приписати стриктном придржавању три кључне стратегије за вирусну безбедност: адекватан проналазак и тестирање извора материјала и ћелијске банке, документовање процена уклањања вируса (студије валидације вируса) и тестирање на вирусе у процесу. Карактеристике биолошких лекова произведених од нових ћелијских супстрата могу се променити са различитим ризицима, а потребне су добре стратегије управљања ризиком да би се осигурала безбедност биолошких лекова. Гуидлинг Тецхнологи има искусан професионални технички тим, који покрива процес филтрације од мале пробе, пилот испитивања, до производње великих размера, наши мембрански и мембрански филтери се широко користе у пре-филтрацији, микрофилтрацији, ултрафилтрацији, концентрацији нанофилтрације, екстракцији и сепарацији; Наше бројне линије производа, од мале лабораторијске филтрације за једнократну употребу до система за филтрирање оријентисаних на производњу, тестирања стерилности, ферментације, ћелијске културе и више, обезбеђују повећану продуктивност.

Јиулинг да обезбеди квалитет производа као први индикатор, у потрази за „смањивањем трошкова, повећањем ефикасности“ на путу истраживања, радујући се сарадњи са вама у будућности како бисте се суочили са изазовима индустрије и тражили бољи развој.

Par: Цасе Схаре|Једноставан и ефикасан процес прикупљања вакцине

Sledeći: Низводни процес пречишћавања вакцине против свињске дијареје